GB/T 23535-2009 脂肪(fáng)酶(méi)製(zhì)劑

範(fàn)圍
本標(biāo)準規定(dìng)了(liǎo)脂肪酶製劑的(dí)術(shù)語和(hé)定義(yì)，產品(pǐn)分(fēn)類，要(yào)求，試(shì)驗方(fāng)法，檢驗規則和(hé)標誌(zhì)，包(bāo)裝，運輸(shū)，貯存。
本(běn)標準適用於(yú)以澱(diàn)粉質(或糖質)為(wéi)原(yuán)料，經微(wēi)生物發酵，提純製得(dé)的中性脂肪酶(méi)製(zhì)劑的(dí)生產(chǎn)，檢(jiǎn)驗和銷售。

術語和定義
下列(liè)術(shù)語和(hé)定義適(shì)用(yòng)於本(běn)標(biāo)準(zhǔn)。
脂(zhī)肪酶(méi)  lipase
能(néng)水解(jiě)甘油(yóu)三(sān)酯或脂肪(fáng)酸酯產生單或雙甘油(yóu)酯和遊(yóu)離脂肪(fáng)酸，將(jiāng)天然油(yóu)脂(zhī)水解為(wéi)脂肪酸及(jí)甘油，同時也(yě)能(néng)催(cuī)化酯合成(chéng)和酯(zhǐ)交換反應的酶。
脂肪(fáng)酶活力(lì)  activity of lipase
脂肪酶活(huó)力(lì)以脂(zhī)肪酶活力(lì)單(dān)位表示，定義為(wéi)1g固體酶粉(或(huò)1mL液(yè)體(tǐ)酶)，在一定溫(wēn)度和pH條(tiáo)件下，1min水解底(dǐ)物(wù)產(chǎn)生1μmol的可(kě)滴(dī)定(dìng)的(dí)脂肪酸，即(jí)為(wéi)1個酶(méi)活力(lì)單位，以(yǐ)u/g(u/mL)表示。

產品分(fēn)類
按(àn)產品的應用(yòng)領域
A類(lèi)產(chǎn)品一一食(shí)品工業和(hé)飼(sì)料(liào)工業(yè)用酶(méi)製(zhì)劑。
B類產品(pǐn)一(yī)一(yī)其(qí)他工業(yè)用酶製劑(jì)。
按產品形態(tài)
固體(tǐ)劑型(xíng)酶(méi)製劑和(hé)液體劑(jì)型酶(méi)製劑。

要求(qiú)
外(wài)觀(guān)
固體劑型(xíng): 白(bái)色至(zhì)黃褐色粉末(mò)或(huò)顆(kē)粒，無結塊，無潮(cháo)解(jiě)現(xiàn)象。無異味(wèi)。有(yǒu)特殊發酵(jiào)氣味(wèi)。
液(yè)體劑型(xíng): 淺(qiǎn)黃色(sè)至棕褐(hè)色(sè)液體，允(yǔn)許(xǔ)有少量(liáng)凝(níng)聚物。無異味(wèi)。有(yǒu)特(tè)殊發(fā)酵(jiào)氣味(wèi)。
理化(huà)要求
應符(fú)合表(biǎo)1的規定。


衛生(shēng)要求
應(yīng)符(fú)合(hé)國(guó)家(jiā)有關(guān)規定(dìng)。

試(shì)驗方法(fǎ)
酶活(huó)力
原(yuán)理(lǐ)
脂肪酶在一定條件下(xià)，能使(shǐ)甘油三(sān)酯(zhǐ)水(shuǐ)解成脂肪酸(suān)，甘(gān)油二酯(zhǐ)，甘油(yóu)單酯(zhǐ)和(hé)甘(gān)油，所釋放(fàng)的(dí)脂(zhī)肪酸(suān)可用標準(zhǔn)鹼溶(róng)液(yè)進(jìn)行中(zhōng)和滴定(dìng)，用pH計或酚酞(tài)指示(shì)液指示反應終(zhōng)點，根據消耗的(dí)鹼(jiǎn)量，計算其酶(méi)活力(lì)。
反(fǎn)應(yīng)式為:

注1: 酯酶的(dí)存在會使檢(jiǎn)測(cè)的脂肪酶的(dí)活(huó)力(lì)增加。蛋白(bái)酶(méi)的存在(zài)會降(jiàng)解(jiě)脂(zhī)肪酶，從而(ér)使(shǐ)檢(jiǎn)測到的脂肪(fáng)酶的活(huó)力(lì)減(jiǎn)小。
注2: 洗(xǐ)滌劑的存在(zài)會(huì)嚴(yán)重影響(xiǎng)本(běn)方法。依不(bù)同洗滌(dí)劑(jì)的(dí)類(lèi)型(xíng)和(hé)濃度不(bù)同(tóng)，這種(zhǒng)影響表(biǎo)現(xiàn)為從*抑(yì)製到激活。
注3: 酶會附著在(zài)塑(sù)料上，因(yīn)此(cǐ)應用(yòng)玻璃器皿溶解(jiě)稀釋，同(tóng)時也應(yīng)用(yòng)玻(bō)璃器皿(mǐn)滴定(dìng)。在溶液(yè)的(dí)轉移中(zhōng)如果(guǒ)時間(jiān)很短(duǎn)，且選擇適當(dāng)的塑料材質(zhì)，可以使(shǐ)用塑料移液槍頭。

分(fēn)析(xī)步驟
待(dài)測(cè)酶液的(dí)製備
一(yī)一(yī)稱(chēng)取(qǔ)酶(méi)樣(yàng)品1g~2g，精.確至(zhì)0.0002g，用磷酸(suān)緩衝液(yè)溶(róng)解並稀(xī)釋。如果樣(yàng)品為(wéi)粉狀，可用少(shǎo)量磷酸(suān)緩衝(chōng)液(yè)溶解後(hòu)用(yòng)玻(bō)璃棒搗(dǎo)研，然後將(jiāng)上清(qīng)液小心傾入容量(liáng)瓶中。若有剩餘殘渣，再加少(shǎo)量磷酸緩(huǎn)衝(chōng)液充(chōng)分(fēn)研磨(mó)，終樣品全部(bù)移(yí)入(rù)容(róng)量(liáng)瓶(píng)中，用(yòng)磷酸緩(huǎn)衝液定(dìng)容至刻(kè)度，搖匀，轉入(rù)高(gāo)速匀漿(jiāng)機組織(zhī)搗碎(suì)機搗(dǎo)研(yán)3min後(hòu)供測定(dìng)。
一一測定時控製酶(méi)液濃度，樣品與對照(zhào)消(xiāo)耗鹼量之差(chà)控製(zhì)在1mL~2mL範圍內。
吸取樣(yàng)品時(shí)，應(yīng)將(jiāng)酶液搖(yáo)匀後(hòu)再(zài)取。

測(cè)定
電(diàn)位(wèi)滴定法(fǎ)(第(dì).一法)
a) 按(àn)pH計(jì)使用說明書(shū)進(jìn)行(háng)儀(yí)器校(xiào)正(zhèng)；
b) 取兩個100mL燒(shāo)杯(bēi)，於(yú)空白(bái)杯(A)和(hé)樣品(pǐn)杯(B)中各加入底物溶(róng)液(yè)4.00mL和磷酸緩衝(chōng)液5.00mL，再於(yú)A杯中(zhōng)加(jiā)入(rù)95%乙醇15.00mL，於40°C±0.2°C水浴(yù)中預熱(rè)5min，然後(hòu)於A，B杯中各加(jiā)待(dài)測(cè)酶(méi)液1.00mL，立(lì)即混匀(yún)計(jì)時(shí)，準確反(fǎn)應(yīng)15min後，於B杯(bēi)中立(lì)即補加(jiā)95%乙醇15.00mL終止反(fǎn)應，取(qǔ)出；
c) 在(zài)燒杯(bēi)中加入(rù)一(yī)枚轉(zhuǎn)子，置(zhì)於(yú)電磁(cí)攪拌(bàn)器上(shàng)，邊攪(jiǎo)拌(bàn)，邊用*標準溶液滴定(dìng)，直(zhí)至(zhì)pH10.3，為(wéi)滴定終(zhōng)點(diǎn)，記(jì)錄(lù)消耗*標準(zhǔn)溶(róng)液(yè)的體(tǐ)積(jī)。
指示(shì)劑(jì)滴定法(fǎ)(第二(èr)法)
a) 取兩個100mL三(sān)角瓶，分別(bié)於(yú)空(kōng)白瓶(A)和(hé)樣(yàng)品(pǐn)瓶(B)中各加入底(dǐ)物(wù)溶液(yè)4.00mL和(hé)磷(lín)酸緩衝(chōng)液(yè)5.00mL，再於(yú)A瓶(píng)中加入95%乙醇(chún)15.00mL，於(yú)40°C±0.2°C水(shuǐ)浴中(zhōng)預熱5min，然後(hòu)於A，B瓶中(zhōng)各加待(dài)測酶液(yè)1.00mL，立即(jí)混(hùn)匀計時，準(zhǔn)確(què)反應15min後(hòu)，於B瓶中立即(jí)補加95%乙醇15.0mL終止反(fǎn)應(yīng)，取出(chū)；
b) 於空(kōng)白和樣品(pǐn)溶(róng)液(yè)中(zhōng)各(gè)加(jiā)酚酞指示液兩(liǎng)滴，用(yòng)*標準溶(róng)液(yè)滴(dī)定，直(zhí)至(zhì)微紅色(sè)並(bìng)保(bǎo)持30s不(bù)褪色為(wéi)滴定終(zhōng)點，記(jì)錄消耗*標(biāo)準溶液(yè)的(dí)體(tǐ)積(jī)。

計算(suàn)
脂(zhī)肪酶製(zhì)劑的酶活力按式(shì)(1)計(jì)算:

式中:
X₁一(yī)一樣(yàng)品的酶活力(lì)，u/g；
V₁一(yī)一滴(dī)定樣(yàng)品時(shí)消耗*標(biāo)準溶(róng)液(yè)的(dí)體(tǐ)積，單位為毫(háo)升(shēng)(mL)；
V₂一(yī)一滴定(dìng)空白(bái)時消耗*標(biāo)準(zhǔn)溶液(yè)的(dí)體積，單位為(wéi)毫升(shēng)(mL)；
c  一一*標準(zhǔn)溶液(yè)濃度，單位為摩(mó)爾(ěr)每升(mol/L)；
50一(yī)一0.05mol/L*溶液1.00mL相當(dāng)於脂肪酸(suān)50μmol；
n₁一(yī)一(yī)樣(yàng)品的稀(xī)釋(shì)倍數；
0.05一(yī)一(yī)*標準(zhǔn)溶液(yè)濃(nóng)度(dù)換(huàn)算(suàn)係(xì)數(shù)；
1/15一一(yī)反(fǎn)應時(shí)間15min，以1min計。
所(suǒ)得(dé)結(jié)果表示至整(zhěng)數。
精密度(dù)
在(zài)重(zhòng)復性條件下獲(huò)得(dé)的(dí)兩次獨(dú)立(lì)測(cè)定(dìng)結(jié)果的絕(jué).對差值(zhí)不(bù)得(dé)超過算(suàn)術(shù)平(píng)均值的2%。

附(fù)錄A  (資料性附(fù)錄)
動態滴定法(fǎ)測定(dìng)脂肪酶的酶活力

範圍(wéi)
本方(fāng)法適用於(yú)測定(dìng)含有或混有(yǒu)脂肪酶(méi)/酯酶(méi)樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)的脂(zhī)肪酶(méi)活力。
特殊的(dí)脂肪酶(méi)或特殊的(dí)成(chéng)品(pǐn)製劑在(zài)樣品(pǐn)製(zhì)備(bèi)階(jiē)段(duàn)需采用(yòng)特殊的(dí)穩定(dìng)或(huò)抽(chōu)提手(shǒu)段以保證(zhèng)檢(jiǎn)測到(dào)所(suǒ)有的(dí)脂(zhī)肪(fáng)酶活力。

原理
脂肪酶水解甘油三酯(zhǐ)生成脂肪酸，使反(fǎn)應體係(xì)的(dí)pH不(bù)斷(duàn)下(xià)降。通過(guò)連(lián)續加(jiā)入鹼(jiǎn)的方(fāng)法(fǎ)保(bǎo)持反應(yīng)體係的pH恒定。鹼滴定的速率與(yǔ)酶活(huó)力成比例。
注(zhù)1: 酯酶(méi)的存(cún)在(zài)會使(shǐ)檢測(cè)的(dí)脂肪(fáng)酶的活(huó)力增加(jiā)。蛋白酶(méi)的存在(zài)會降(jiàng)解脂(zhī)肪酶(méi)，從而(ér)使檢(jiǎn)測到的脂肪酶(méi)的活(huó)力(lì)減(jiǎn)小。
注(zhù)2: 洗(xǐ)滌劑(jì)的存在(zài)會嚴重(zhòng)影響本(běn)方法。依不同洗滌劑(jì)的類型和(hé)濃(nóng)度不同(tóng)，這種影響(xiǎng)表現為從(cóng)*抑製(zhì)到激活(huó)。
注3: 酶會附著在(zài)塑(sù)料(liào)上(shàng)，因(yīn)此應用玻(bō)璃(lí)器皿溶(róng)解(jiě)稀(xī)釋(shì)，同(tóng)時也(yě)應用玻(bō)璃(lí)器(qì)皿滴定(dìng)。在溶液的(dí)轉移(yí)中(zhōng)如(rú)果(guǒ)時(shí)間(jiān)很短(duǎn)，且選擇適(shì)當(dāng)的塑料(liào)材質，可以使用塑料移液(yè)槍頭(tóu)。
反(fǎn)應式(shì)

反應(yīng)條(tiáo)件
溫度: 30°C±1°C。
pH: 7.00。
底(dǐ)物(wù)濃度(dù): 0.16mol/L的三丁酸甘(gān)油(yóu)酯。
反(fǎn)應時間: 至(zhì)少1.5min(隻有綫(xiàn)性反應(yīng)區用於計算斜率(shuài))。
分析(xī)範圍(wéi)
樣品的分析(xī)範(fàn)圍是0.2u/mL~4.0u/mL。如果(guǒ)可(kě)能(néng)，所(suǒ)有樣(yàng)品應在(zài)1.5u/mL~4.0u/mL的(dí)範(fàn)圍(wéi)內(nèi)被分(fēn)析(xī)。
檢測限
對於(yú)液體(tǐ)樣品檢(jiǎn)測限為(wéi)20u/g，相當(dāng)於2.5g樣(yàng)品溶解在10mL溶(róng)液中，然後(hòu)再稀(xī)釋25倍(bèi)。對於(yú)固體樣品(pǐn)檢測(cè)限為(wéi)50u/g，相(xiāng)當(dāng)於(yú)1.0g樣(yàng)品(pǐn)溶解(jiě)在(zài)10mL溶(róng)液中，然(rán)後(hòu)再(zài)稀釋(shì)25倍(bèi)。

儀器和設備(bèi)
具有動態滴定(pH-stat)功(gōng)能的滴定儀。在(zài)動(dòng)態(tài)滴定儀(yí)中(zhōng)還要注意選擇適當的(dí)pH電極(jí)(對(duì)pH值響應(yīng)快)和滴(dī)定分(fēn)配(pèi)樣(yàng)品(pǐn)準(zhǔn)確(què)(特別(bié)是(shì)滴(dī)定*)。還要選擇(zé)玻(bō)璃(lí)滴(dī)定(dìng)容器(qì)(帶(dài)水浴夾套)和有效的(dí)攪拌(bàn)器(qì)(棒狀螺旋攪拌器(qì)優於磁力攪拌)，這樣才(cái)構成(chéng)完(wán)整(zhěng)的係統。
乳化(huà)器(qì)。
恒溫水浴(yù): 精(jīng)度±0.2°C。
溫(wēn)度計(jì): 精(jīng)度(dù)±0.2°C。
自(zì)動(dòng)移液(yè)器(qì)。

試(shì)劑
除非(fēi)另(lìng)有(yǒu)說(shuō)明，在分(fēn)析中(zhōng)僅使用確(què)認為(wéi)分(fēn)析(xī)純(chún)的試劑(jì)和蒸餾水(shuǐ)或去(qù)離子(zǐ)水或(huò)相(xiāng)當純度(dù)的水。
三(sān)丁(dīng)酸(suān)甘(gān)油(yóu)酶(méi)(C₁₅H₂₆O₆)。
氯(lǜ)化鈉(NaCl)。
磷(lín)酸(suān)二氫鉀(KH₂PO₄)。
阿拉伯膠(jiāo)。
甘(gān)氨酸(H₂NCH₂COOH)。
甘(gān)油(yóu)[HOCH₂CH(OH)CH₂OH]。
*片劑(NaOH)。
電極校正(zhèng)液(yè)(pH7.0)。
電極校正液(yè)(pH4.01)。
96%乙醇。
氮氣(N₂)。
*溶(róng)液[c(NaOH)=1mol/L]: 按(àn)照 GB/T 601 配製(zhì)。
*滴定液(yè)[c(NaOH)=0.025mol/L]: 取上(shàng)述溶液(yè)25mL，用水(shuǐ)稀釋並定(dìng)容到(dào)1000mL。
配(pèi)好後(hòu)需(xū)用(yòng)適宜的(dí)設(shè)備脫氣(qì)。
*滴(dī)定液[c(NaOH)=0.005mol/L]: 取(qǔ)*滴定(dìng)液25mL，用(yòng)水(shuǐ)稀(xī)釋(shì)並定容(róng)到5000mL。
乳化(huà)劑: 分(fēn)別稱取(qǔ)阿拉伯(bó)膠30.0g，氯化鈉(nà)53.7g和(hé)磷酸二氫鉀1.20g。量取(qǔ)甘(gān)油1620mL 。
將大約180mL去(qù)離(lí)子水倒入400mL的燒杯中，加(jiā)入(rù)攪拌子，開始(shǐ)高速攪拌，將阿(ā)拉伯膠緩慢倒入(rù)水中，不(bù)斷攪(jiǎo)拌直(zhí)至(zhì)全部溶解。將(jiāng)稱好(hǎo)的氯化鈉和磷(lín)酸二(èr)氫鉀轉入(rù)到3L容量(liáng)瓶中，加350mL水充分(fēn)攪拌直至*溶解，將甘油(yóu)全(quán)部(bù)加(jiā)入。將(jiāng)阿(ā)拉伯(bó)膠(jiāo)溶(róng)液轉(zhuǎn)入(rù)容量瓶中，充(chōng)分攪拌後(hòu)用(yòng)水定容。
底物(wù)乳劑(jì): 稱(chēng)取三丁酸甘油(yóu)酯(zhǐ)62.5g，分別量取乳化劑200mL和水940mL，混合(hé)。將混(hùn)合液(yè)匀漿(jiāng)器處理(lǐ)3min(7000r/min)。匀漿後的溶(róng)液先用普通(tōng)的磁(cí)力(lì)攪(jiǎo)拌(bàn)攪(jiǎo)拌至(zhì)少20min，然後調(tiáo)節(jié)pH到4.75±0.05。
不同來(lái)源(yuán)和批號的(dí)三丁酸甘油酯(zhǐ)和阿(ā)拉伯膠(jiāo)對試(shì)驗結果(guǒ)有影(yǐng)響，在更換(huàn)產品或(huò)批號前需(xū)進(jìn)行有(yǒu)效(xiào)性(xìng)確認。
甘(gān)氨酸(suān)緩衝(chōng)液1(7.51g/L): 稱(chēng)取(qǔ)甘氨酸(suān)37.54g和(hé)*片劑(jì)18.5g，用水(shuǐ)溶(róng)解並定(dìng)容到(dào)5L。如需(xū)要，調(tiáo)節溶(róng)液(yè)的(dí)pH到10.8±0.05。
甘氨酸(suān)緩(huǎn)衝(chōng)液2(0.75g/L): 取(qǔ)100mL上(shàng)述甘(gān)氨酸緩衝(chōng)液(yè)1，用水(shuǐ)定容(róng)到1000mL。如(rú)需(xū)要(yào)，調(tiáo)節(jié)溶(róng)液的pH到(dào)10.8±0.05。

標準曲綫(xiàn)和(hé)樣品(pǐn)處(chǔ)理(lǐ)
標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫
稱取(qǔ)一(yī)定量的已(yǐ)知活力(lì)酶標準(zhǔn)品，精(jīng).確到0.0001g。然(rán)後用甘氨酸(suān)緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)2溶解(jiě)並稀(xī)釋(shì)，製成(chéng)標準(zhǔn)儲(chǔ)備(bèi)液。標準儲備液的(dí)濃度為20u/mL。然(rán)後按照(zhào)表A.1配製溶(róng)液，並(bìng)繪製(zhì)標準曲綫(xiàn)。


標(biāo)準對照(zhào)
可(kě)使用(yòng)已(yǐ)知活(huó)力(lì)的(dí)樣品作(zuò)為(wéi)標準(zhǔn)對照。標準對(duì)照的處理同(tóng)樣(yàng)品(pǐn)。
樣品處理
不同的樣品(pǐn)需做(zuò)不同的預(yù)處理，以激活(huó)或保護(hù)在(zài)樣品基(jī)質中的脂(zhī)肪酶。
可考(kǎo)慮(lǜ)采用甘氨酸緩衝(chōng)液(yè)1和水(shuǐ)來分別(bié)溶解(jiě)和(hé)稀(xī)釋(shì)樣(yàng)品的方(fāng)法，或甘氨(ān)酸緩衝(chōng)液(yè)2來溶(róng)解和(hé)稀(xī)釋樣品的(dí)方法(fǎ)，或直(zhí)接用水(shuǐ)溶解(jiě)和(hé)稀(xī)釋(shì)樣品(pǐn)的方法，以求(qiú)得到(dào).好(hǎo)的效果(guǒ)。樣品(pǐn)的(dí)溶解液和稀釋(shì)液應(yīng)充分(fēn)攪(jiǎo)拌均匀(yún)。
樣品(pǐn)應終稀(xī)釋到(dào)酶活(huó)力在1.5u/mL~4.0u/mL範圍內。
如可能，樣(yàng)品稀釋完應立(lì)即測定(dìng)。

分析步驟
係統準備(bèi)
按照無(wú)水(shuǐ)乙醇，適當(dāng)的(dí)肥皂水，熱(rè)水，去(qù)離(lí)子水，底物的(dí)順序(xù)清(qīng)洗滴定容(róng)器(qì)和管(guǎn)路(lù)。
保證(zhèng)水浴(yù)的溫度(dù)在30.0°C±0.5°C。
校正(zhèng)pH電(diàn)極(jí): 每天使用前要(yào)校正pH電(diàn)極的(dí)靈敏(mǐn)度(dù)在(zài)95%~102%；pH7.00應在(zài)6.985~6.989之(zhī)間(jiān)；pH4.01應在4.009~4.012之間(jiān)。如果達(dá)不到此(cǐ)標準，按照pH電極使用說(shuō)明進行(háng)衝洗(xǐ)並再次校正。
分(fēn)析(xī)
pH電(diàn)極(jí)用(yòng)後(hòu)浸泡在飽和(hé)的(dí)氯化.鉀(jiǎ)(KCl)溶(róng)液中，使用(yòng)前(qián)衝(chōng)洗(xǐ)。
在反應(yīng)溶液(yè)表(biǎo)麵用氮(dàn)氣吹(chuī)充，以(yǐ)防(fáng)止(zhǐ)空氣中(zhōng)二(èr)氧化碳的幹(gān)擾(rǎo)。分析(xī)前(qián)一定要保(bǎo)證(zhèng)底物的(dí)溫(wēn)度為(wéi)30.0°C±0.5°C。
在(zài)分(fēn)析每個(gè)樣(yàng)品前要用(yòng)0.005mol/L的(dí)*溶(róng)液(yè)衝洗(xǐ)滴(dī)定(dìng)皿和(hé)管路。
試驗(yàn)步驟如(rú)下:
一一將15mL的底物加入(rù)到(dào)滴定皿中(zhōng)。滴(dī)定前pH電極(jí)的讀數(shù)應(yīng)小於7.0。
一一加(jiā)1mL樣(yàng)品稀釋液加入到(dào)滴定(dìng)皿(mǐn)中。反(fǎn)應(yīng)體係(xì)的pH在滴定過(guò)程中保持(chí)在(zài)7.0。記(jì)錄為(wéi)保持(chí)恒(héng)定(dìng)pH而加入的(dí)滴(dī)定液(yè)的量。
一一(yī)滴(dī)定結束後滴(dī)定儀(yí)打印(yìn)出滴定曲綫綫性範(fàn)圍(wéi)的平(píng)均斜率(如果(guǒ)使(shǐ)用不(bù)同(tóng)的設(shè)備(bèi)，數據可(kě)能以其他(tā)形(xíng)式(shì)輸出)。滴定(dìng)曲(qū)綫應(yīng)有一(yī)段持續1.5min的(dí)綫性輸出。
一(yī)一先(xiān)分(fēn)析(xī)標準(zhǔn)曲綫(xiàn)(每(měi)個標準點分析(xī)1次)，然後(hòu)分析(xī)一個標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，再分析樣(yàng)品(每個(gè)樣品分析1次)。重要(yào)的是(shì)一天(tiān)之(zhī)中(zhōng)非一次運行(háng)的樣品不能使用相(xiāng)同的(dí)標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)。事(shì)先應知道(dào)每一(yī)次運行(háng)的(dí)樣品的個(gè)數。如果樣品在(zài)當天(tiān)晚(wǎn)些(xiē)時(shí)候分析(xī)，標準(zhǔn)溶液要(yào)重新(xīn)分(fēn)析(xī)。
一(yī)一(yī)每個樣品分(fēn)析前和(hé)後一個樣品(pǐn)完成分析(xī)後，係統(tǒng)將進(jìn)行衝(chōng)洗。排空(kōng)底物(wù)容(róng)器和(hé)管(guǎn)路(lù)，並(bìng)用乙醇衝洗。如果係統將會在(zài)1周(zhōu)以上(shàng)時間不(bù)再使用，則需要(yào)用(yòng)去離子(zǐ)水(shuǐ)進(jìn)行衝(chōng)洗(xǐ)並(bìng)用(yòng)*溶(róng)液或(huò)相同(tóng)濃(nóng)度的鹽酸(suān)溶(róng)液充滿(mǎn)敏感(gǎn)部(bù)件(jiàn)，避免出現鹽(yán)類結(jié)晶。

計算(suàn)
結果計(jì)算
利用標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的測(cè)定值作標準(zhǔn)曲綫，其(qí)中X 軸(zhóu)為標準品(pǐn)酶活(huó)力(lì)， Y 軸為(wéi)相(xiāng)應(yīng)的(dí)滴(dī)定反(fǎn)應的(dí)平均斜率(mL/min)。標準(zhǔn)曲綫應(yīng)該是一條直(zhí)綫。樣品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液的活(huó)力(lì)從(cóng)標(biāo)準曲(qū)綫中(zhōng)讀出(chū)，然(rán)後按式(A.1)計(jì)算:

式中:
X₃一一(yī)樣(yàng)品的酶活(huó)力(lì)，u/g；
A 一一稀釋(shì)樣品在標準曲綫上(shàng)讀出的酶(méi)活力(lì)，u/mL；
V₃一(yī)一樣(yàng)品(pǐn)溶解(jiě)用(yòng)的容量(liáng)瓶(píng)體(tǐ)積(jī)，單(dān)位為毫升(shēng)(mL)；
n₂一(yī)一第(dì)二(èr)次(cì)稀釋(shì)的倍數；
m₃一一樣品的質量(liáng)，單位為克(g)。
結(jié)果的確(què)認(rèn)
當滿(mǎn)足以下(xià)條件時(shí)可(kě)以(yǐ)確(què)認(rèn)本(běn)次(cì)分(fēn)析(xī)有效(xiào):
一(yī)一(yī)標(biāo)準對照的檢(jiǎn)測值在本方法所(suǒ)規定的可接(jiē)受偏差範圍內(nèi)；
一一(yī)標準曲(qū)綫的斜率應(yīng)滿足: 1) 標準點1小(xiǎo)於0.02mL/min；2) 標準(zhǔn)點6在0.14mL/min~0.18mL/min之間；
一一標準曲綫(xiàn)的相關(guān)係數(r²)大於(yú)等於0.995；
一一(yī)標準(zhǔn)點(diǎn)~點6的相關(guān)係(xì)數的應(yīng)大(dà)於(yú)0.9995。標準(zhǔn)點(diǎn)1~2的r²大(dà)於0.995是可接受的(dí)。
如(rú)果達不(bù)到此(cǐ)條(tiáo)件，應檢查分析係(xì)統(tǒng)。
結果(guǒ)的(dí)表示(shì)
結(jié)果給出3位(wèi)有效數(shù)字(zì)。如(rú)果結(jié)果低(dī)於檢(jiǎn)測限，則(zé)表示(shì)為(wéi)<20u/g(液(yè)體)或<50u/g(固(gù)體)。
精(jīng)密度
在重復性(xìng)條件(jiàn)下(xià)獲得(dé)的(dí)兩次獨立(lì)測定(dìng)結果的(dí)絕.對(duì)差值(zhí)不得超(chāo)過(guò)算術平均(jūn)值的5%。