GB/T 42239.2-2022 洗滌用酶製劑(jì) 第2部(bù)分: 脂肪酶

範(fàn)圍(wéi)
本文(wén)件(jiàn)規(guī)定了(liǎo)洗滌(dí)用脂肪酶的產(chǎn)品分(fēn)類，要求，試驗(yàn)方(fāng)法(fǎ)，檢驗規(guī)則
，以及(jí)標誌，包(bāo)裝，運(yùn)輸，貯(zhù)存和保質期(qī)
。
本(běn)文件適(shì)用(yòng)於(yú)經微(wēi)生物(wù)發(fā)酵，提純等工藝製(zhì)得(dé)的(dí)用(yòng)於洗(xǐ)滌劑(jì)工(gōng)業(yè)的(dí)脂(zhī)肪(fáng)酶(méi)
。

術語和(hé)定義
下(xià)列術(shù)語和定義(yì)適用於本文件
。
脂(zhī)肪(fáng)酶  lipase
可將(jiāng)甘(gān)油三(sān)酯(zhǐ)(油脂)水(shuǐ)解
，在(zài)不同(tóng)階(jiē)段(duàn)可釋(shì)放出(chū)脂肪(fáng)酸(suān)，甘油二(èr)酯(zhǐ)，甘油(yóu)單酯及(jí)甘油(yóu)
，同時(shí)也(yě)能催(cuī)化(huà)酯(zhǐ)合(hé)成(chéng)和(hé)酯交換(huàn)反應(yīng)的(dí)酶(méi)
。
脂(zhī)肪酶酶活力(lì)  lipase activity
脂肪(fáng)酶(méi)催(cuī)化脂肪(fáng)水(shuǐ)解(jiě)的(dí)能力
。
注(zhù): 脂肪酶酶(méi)活力以脂肪(fáng)酶酶(méi)活力單位(wèi)表(biǎo)示(shì)
，1g固體(tǐ)酶粉(或(huò)1mL液體(tǐ)酶)
，在一(yī)定溫度和(hé)pH條件下
，1min內(nèi)水解底物(wù)產生(shēng)1μmol的可(kě)滴定脂肪酸(suān)
，即為1個酶活力(lì)單(dān)位(wèi)
，用U/g表示
。

符號和縮略語
下(xià)列符號和(hé)縮(suō)略語適用於(yú)本(běn)文(wén)件
。
JB-04: 胡蘿卜素豬油汙布
。
F₁: 洗(xǐ)前白度(dù)值
。
F₂: 洗後白(bái)度值
。
R: 去(qù)汙(wū)值
。
P: 去(qù)汙比值
。

產(chǎn)品分類
按產品(pǐn)形(xíng)態分為液體劑型(xíng)和(hé)固體劑型(xíng)
。

要(yào)求(qiú)
外(wài)觀和理化性(xìng)能(néng)要求(qiú)
產品的外(wài)觀和(hé)理化(huà)性(xìng)能指(zhǐ)標(biāo)應符合表1的規定
。


定量包裝要求
每批(pī)產品(pǐn)的銷售包(bāo)裝淨含(hán)量(liáng)應(yīng)符(fú)合(hé) JJF 1070 的(dí)要(yào)求
。

試(shì)驗方法
酶(méi)活力
按(àn)附(fù)錄A進行(háng)
。
采(cǎi)用不同於附錄(lù)A的方法(fǎ)測定(dìng)時
，應(yīng)提供(gōng)所應(yīng)用的酶活力單(dān)位與本文(wén)件確定的(dí)酶(méi)活力單(dān)位的轉換係(xì)數
。

附錄A  (規(guī)範性(xìng))
酶活(huó)力(lì)的(dí)測定(dìng)
A.1 方(fāng)法概(gài)要(yào)
脂肪酶(méi)在一(yī)定條件(jiàn)下(xià)
，能使甘(gān)油三(sān)酯(zhǐ)水解(jiě)成脂肪(fáng)酸，甘(gān)油(yóu)二酯，甘(gān)油單酯和甘油(yóu)
，所釋(shì)放的脂肪酸可(kě)用(yòng)標準(zhǔn)鹼(jiǎn)溶(róng)液(yè)進行(háng)中和滴(dī)定
，用酚(fēn)酞指(zhǐ)示(shì)劑(jì)或自(zì)動滴定儀(yí)指(zhǐ)示反應終(zhōng)點
，根據(jù)消(xiāo)耗的鹼量
，計(jì)算其酶(méi)活(huó)力
。反應式(shì)為(wéi):
RCOOH+NaOH→RCOONa+H₂O
注(zhù)1: 洗滌劑的存在(zài)會嚴重影響(xiǎng)本方(fāng)法
。依不(bù)同(tóng)洗(xǐ)滌劑的(dí)類(lèi)型和濃(nóng)度不(bù)同
，這(zhè)種(zhǒng)影(yǐng)響表現(xiàn)為從(cóng)抑製到(dào)激活
。
注(zhù)2: 酶會附著(zhuó)在塑料上(shàng)
，因此實(shí)驗(yàn)中用(yòng)玻璃(lí)器具(jù)
，避免使用塑料材質器具(jù)(移(yí)液槍(qiāng)頭除(chú)外)
。

A.2 試劑
A.2.1 聚(jù)乙烯(xī)醇(chún)(PVA)
，聚合度(dù)1750±50[不(bù)同來(lái)源(yuán)或批號(hào)的PVA對(duì)實(shí)驗結果(guǒ)有影響
，結(jié)果報告應標明(míng)聚(jù)乙烯(xī)醇(PVA)廠(chǎng)家(jiā)及生產批號]
。
A.2.2 橄欖(lǎn)油(不(bù)同來源或批號(hào)的橄(gǎn)欖(lǎn)油對實驗(yàn)結(jié)果(guǒ)有(yǒu)影響
，結果報告應標(biāo)明橄欖油廠家(jiā)及生(shēng)產(chǎn)批號)
。
A.2.3 95%乙(yǐ)醇
。
A.2.4 磷酸(suān)二氫鉀(KH₂PO₄)
。
A.2.5 十二水磷(lín)酸氫二(èr)鈉(nà)(Na₂HPO₄·12H₂O)
。
A.2.6 *
。
A.2.7 鹽酸
。
A.2.8 酚(fēn)酞
。

A.3 儀(yí)器(qì)
A.3.1 恒溫水(shuǐ)浴(yù): 精度(dù)為±0.2°C
。
A.3.2 高(gāo)速匀漿(jiāng)機(jī)
。
A.3.3 pH計(jì): 精度為0.01pH單(dān)位(wèi)
。
A.3.4 自動電(diàn)位滴定儀(yí)
。
A.3.5 自動(dòng)移液器
。
A.3.6 電磁(cí)加熱(rè)攪拌(bàn)器(qì)
。
A.3.7 電(diàn)磁(cí)攪拌器
。
A.3.8 微(wēi)量滴(dī)定(dìng)管(guǎn): 10mL
，分(fēn)刻(kè)度≤0.05mL
。
A.3.9 分析天平(píng): 精(jīng)度為0.0001g
。

A.4 溶液(yè)
A.4.1 2%PVA溶(róng)液
稱取(qǔ)聚乙(yǐ)烯(xī)醇(chún)(PVA)10g(精確(què)至0.1g)到500mL燒杯中(zhōng)
，加水400mL
，放入合適的轉(zhuǎn)子
，在電(diàn)磁加熱攪拌(bàn)器上(shàng)邊加熱(rè)邊(biān)攪拌(bàn)
，攪(jiǎo)拌(bàn)速(sù)度以(yǐ)能(néng)把所有的PVA攪拌(bàn)起(qǐ)來為宜
，在(zài)微沸(fèi)狀態(tài)下加(jiā)熱攪拌約1h
，直至全(quán)部溶解
，在攪拌狀態下(xià)逐漸(jiàn)冷卻至室(shì)溫
，定容到500mL
，該(gāi)溶液(yè)室溫下有效期為(wéi)2d
，密(mì)封保存(cún)
。
注: 不能使(shǐ)用如(rú)冰塊(kuài)等(děng)快速冷卻(què)方(fāng)式(shì)
。
A.4.2 橄(gǎn)欖(lǎn)油(yóu)底物(wù)溶(róng)液
稱取2%PVA溶液150g
，加橄欖(lǎn)油50g
，用(yòng)高(gāo)速匀漿機(jī)在7000r/min(當乳化(huà)效果(guǒ)不好(hǎo)時可加大轉(zhuǎn)速(sù))下(xià)處理3min
，即成乳白色(sè)PVA乳化(huà)液(yè)
，放入(rù)轉子
，在電磁攪拌(bàn)器上攪拌(bàn)約20min
，密(mì)封保(bǎo)存
，該溶液(yè)室溫下有效期為2d
。若(ruò)底(dǐ)物溶液(yè)在保存(cún)期內出(chū)現底部分(fēn)層(céng)現(xiàn)象(xiàng)
，應重(zhòng)新(xīn)配製
，若(ruò)重(zhòng)新配製依(yī)然(rán)有底部分層(céng)現象或者(zhě)在(zài)水浴中(zhōng)反(fǎn)應時有明顯沉澱產(chǎn)生
，更換(huàn)其(qí)他(tā)來源(yuán)的聚乙烯(xī)醇(PVA)
。
注: 每(měi)次(cì)使用前(qián)需要(yào)攪拌並在(zài)攪拌的狀(zhuàng)態(tài)下移取該(gāi)溶(róng)液(yè)
，每次使用(yòng)完畢及時密(mì)封保(bǎo)存
。
A.4.3 鹽酸(suān)溶液(1mol/L)
A.4.4 *溶液(0.5mol/L)
A.4.5 磷(lín)酸緩衝(chōng)液(yè)(pH為7.5)
稱取磷酸二氫(qīng)鉀(jiǎ)(KH₂PO₄)19.6g
，十二水磷(lín)酸(suān)氫(qīng)二鈉(nà)(Na₂HPO₄·12H₂O)396.2g
，加(jiā)水約(yuē)4.5L
，攪拌至溶解(jiě)均匀(yún)
，用(yòng)0.5mol/L*溶液(yè)或1mol/L鹽酸(suān)溶液調整pH至7.50±0.05
，定(dìng)容到(dào)5L
。
A.4.6 *標準溶液(yè)(0.05mol/L)
按(àn) QB/T 2739 配(pèi)製(zhì)與標定(dìng)0.5mol/L的(dí)*標準溶液(yè)
。使用時
，準確稀釋10倍
。
A.4.7 酚酞指示液(10g/L)

A.5 樣品溶液的(dí)製備(bèi)
稱取約1g樣品(pǐn)(稱(chēng)準至(zhì)0.001g)
，用(yòng)磷(lín)酸緩(huǎn)衝液溶(róng)解(jiě)並(bìng)稀釋
。樣(yàng)品(pǐn)稱量定容後(hòu)放入(rù)轉子
，在電磁(cí)攪拌器上(shàng)攪(jiǎo)拌(bàn)15min
。
稀(xī)釋(shì)時控製酶(méi)液濃度(dù)
，推(tuī)薦稀釋倍(bèi)數參(cān)考(kǎo)表A.1
，例(lì)如
，當(dāng)樣品(pǐn)酶活力約為(wéi)100000U/g時
，稱量約1g樣(yàng)品到100mL容(róng)量瓶中(zhōng)
，再(zài)稀(xī)釋(shì)200倍
。樣(yàng)品(pǐn)與空白(bái)消耗鹼(jiǎn)量(liáng)之差(chà)在(zài)1.4mL~1.6mL範(fàn)圍(wéi)內(nèi)
，若(ruò)最終滴定(dìng)結(jié)果超出該範圍
，重(zhòng)新(xīn)稀(xī)釋(shì)直至該(gāi)範(fàn)圍內(nèi)
。


A.6 試驗(yàn)步驟
A.6.1 程序
按照表A.2所(suǒ)列程(chéng)序分(fēn)別進(jìn)行(háng)空(kōng)白和(hé)樣品試驗(yàn)
，選擇自動電位(wèi)滴定(dìng)法或酚(fēn)酞指示劑滴定(dìng)法進(jìn)行滴定(dìng)
。


A.6.2 滴定(dìng)
A.6.2.1 自動電(diàn)位(wèi)滴定(dìng)法
對自(zì)動電位滴定儀(yí)進行儀器(qì)校正(zhèng)
，用0.05mol/L的(dí)NaOH標準溶(róng)液即(jí)刻滴(dī)定
，以突躍(yuè)為(wéi)滴(dī)定終(zhōng)點
，最(zuì)終(zhōng)溶(róng)液pH在30s內保(bǎo)持不變
，記錄消耗0.05mol/L的(dí)NaOH標準溶液(yè)的體(tǐ)積
。
A.6.2.2 酚酞指示劑滴定(dìng)法
加(jiā)酚(fēn)酞(tài)指示劑兩滴
，用0.05mol/L的NaOH標準溶液(yè)即(jí)刻滴(dī)定(dìng)
，滴(dī)定至微(wēi)紅色(sè)並(bìng)保持在30s內不(bù)退色為滴(dī)定終(zhōng)點
，記錄(lù)消耗(hào)0.05mol/L的(dí)NaOH標(biāo)準溶(róng)液(yè)的(dí)體積(jī)
。

A.7 結(jié)果計算
產品的酶活力X以U/g表示
，按(àn)公(gōng)式(A.1)計算:

式中:
X ——產(chǎn)品的酶活(huó)力
，單位(wèi)為(wéi)酶活(huó)力(lì)單位(wèi)(U/g)；
V₁ ——滴(dī)定樣品時(shí)消(xiāo)耗(hào)0.05mol/L*標(biāo)準溶液的(dí)體積
，單(dān)位為(wéi)毫(háo)升(mL)；
V₂ ——滴(dī)定空白(bái)時消耗0.05mol/L*標準溶(róng)液(yè)的體(tǐ)積(jī)
，單位為(wéi)毫升(mL)；
c ——*標(biāo)準溶(róng)液濃(nóng)度
，單位(wèi)為(wéi)摩爾(ěr)每升(mol/L)；
0.05——*標準溶液(yè)濃(nóng)度(dù)換(huàn)算係數(shù)；
n ——試樣的稀(xī)釋倍數；
50——0.05mol/L*溶(róng)液(yè)1.00mL相(xiāng)當於(yú)脂(zhī)肪(fáng)酸50μmol
m ——試樣的質(zhì)量
，單(dān)位為克(kè)(g)；
1/15——反應時間15min
，以1min計(jì)
。
結果(guǒ)按修(xiū)約值(zhí)表(biǎo)示
，當(dāng)結果大於或(huò)等(děng)於10⁵
，後(hòu)三(sān)位(wèi)取整；當(dāng)結果大(dà)於或等(děng)於10⁴且小於10⁵
，後兩位取整；當(dāng)結(jié)果大(dà)於(yú)或(huò)等(děng)於10³且小於(yú)10⁴
，後一位(wèi)取整
。

A.8 精(jīng)密(mì)度(dù)
在重復(fù)性(xìng)條件下獲(huò)得的兩(liǎng)次(cì)獨立測(cè)定結果的絕(jué)對差值不大於(yú)這兩(liǎng)個測定(dìng)值(zhí)的(dí)算術平均值的(dí)10%
，以(yǐ)大(dà)於(yú)10%的情(qíng)況不超過5%為前(qián)提
。